技术原理
CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出现的一种由sgRNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。在这一系统中,sgRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA 进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠基因组特定基因位点进行精确编辑,目前瑞思元已经成功将此技术应用于小鼠基因敲除/敲入模型制备,以及条件性敲除(Loxp系统)模型制备。
目前瑞思元采取优化过的野生型Cas9和双切口Cas9n(Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn)。采用优化过的双切口Cas9n(OCASn)可以将脱靶效应降到最低。
常规基因敲除小鼠
应用sgRNA-Cas9的方法对小鼠所有组织和细胞中的目的基因中全部外显子或某些重要的外显子或者结构功能域进行敲除,得到目的基因表达沉默的小鼠。
运用
研究目的基因(完全性敲除后非致死性)对全身生理的功能,
可用于自发性大/小鼠疾病模型的建立,研究疾病致病机制和疾病治疗的药物研发;
技术优势
研发周期短(2-3个月),敲除效率高;
可实现多基因同时敲除;
打破对小鼠遗传品系的限制,可以实现不同遗传背景或在已有基因修饰小鼠模型基础上进行基因编辑;
制备流程
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